昆蟲sf9細胞培養

                      Sf9培養要點:
                      溫度:27-28攝氏度
                      pH:,sf9**適的pH6.2,隨培養時間的延長,Ph值會增加
                      傳代時間:72h(三天左右)
                      細胞來源:Sf9(貨號B825-01)和Sf21(貨號B821-01)細胞系是傳統的用于桿狀病毒表達的細胞系,源于美G農業部昆蟲病理實驗室。此細胞系適用于InsectSelect系統。這兩株細胞衍生于IPLBSF-21細胞系,來源于秋蠅蠕蟲(草地夜蛾)蛹的卵巢組織。(以上來自invitrogen)
                      細胞特點:規則的帶有顆粒球形。貼壁緊。
                      標準條件的定義:
                      培養**低密度:0.6/ml(健康對數生長期細胞活率**少應不低于90%?;盥实陀?0%細胞不是在**佳條件下培養不能用于實驗)1×/mL將出現對數生長狀態
                       
                      傳代培養:傳代培養需將細胞調整到維持對數生長狀態和**大活率。
                       
                      貼壁培養: 貼壁細胞傳代需在細胞長成單層(如下定義)然后1:5(細胞體積:**后培養基體積)稀釋維持對數生長。形成單層細胞可以傳代培養
                       
                      懸浮培養:在細胞密度達到2.0×-2.5×細胞/mL后將密度調整**0.7×-1.0×細胞/mL進行懸浮傳代。確保傳代細胞密度不高于4×個/mL或保持密度高于1×個/mL以達到對數生長狀態。
                       
                      Sf9懸浮培養所需要的細胞數
                      培養基:sf-900 Ⅲ SFM(添加2%的血清減小感染過程中蛋白水解量)
                      培養瓶與培養體積:
                       
                      凍存:一旦細胞系建立且倍增規律則可以進行凍存。細胞需達到90%活率和80-90%融合的要求(如:低代次)推薦凍存幾管。當融解細胞,它將會達到**佳使用狀態。
                       
                      1. 用細胞計數板計數細胞。需要足夠的如上表所示密度的細胞凍存2-4管。細胞可是懸浮或貼壁培養;
                      2. 將無菌凍存管立于冰上,做好標記;
                      3. 室溫400-600×g離心10min。移除上清。
                      4. 以給定的密度在凍存液中重懸細胞;
                      5. 移取1mL細胞懸液置于無菌凍存管中;
                      6. 置于-20℃1h,然后移**-80℃24-48h;
                      7. 儲存于液氮中。
                       
                      轉染的細胞:需要的是對數期的細胞>95%發育能力,可以完成成功的轉染。
                      載氧:對于**優生長條件和蛋白的表達,昆蟲細胞要求被動的通氧。積極的通氧系統要求溶氧飽和在10%-50%
                      Sf900II和sf900Ⅲ的區別:一般推薦Sf900II來大量表達蛋白
                       
                      Sf900II含有表面活性劑(剪切力保護劑(保護細胞在轉瓶中培養時不會受到剪切力傷害))
                       
                      當設計純化多聚組氨酸標簽蛋白的計劃時,注意無血清培養基不能直接用于螯合樹脂,因為培養基的成分會除去樹脂中的鎳離子。
                      細胞培養的一般順序:復蘇——傳代——傳代穩定——凍存
                      應當遵循的一般過程:復蘇——貼壁培養——懸浮——懸浮擴大培養(產生目標蛋白)
                      (也可不經過貼壁培養,直接懸浮培養)
                      貼壁時間:45min
                      懸浮的轉速:80rpm
                      附:離心機rcf與g的換算:
                       
                       
                      無血清培養基可以選擇性加入一定的抑菌劑防止細菌或者真菌污染:
                      培養基:GIBCO-SFM900
                            加青霉素鏈霉素抑制細菌生長兩性霉素B抑制真菌生長
                       
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